大學(xué)生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告三篇

　　篇一：浙江大學(xué)生物傳感器實(shí)驗(yàn)報(bào)告

　　實(shí) 驗(yàn) 報(bào) 告

　　生物傳感器 與測(cè)試技術(shù)

　　課程名稱 生物傳感器與測(cè)試技術(shù) 姓 名 徐夢(mèng)浙學(xué) 號(hào) 專 業(yè) 生物系統(tǒng)工程指導(dǎo)老師 王建平/葉尊忠

　　一 熱電偶傳感器實(shí)驗(yàn)

　　一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

　　了解熱電偶測(cè)量溫度的原理和調(diào)理電路，熟悉調(diào)理電路工作方式。

　　二、 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：

　　本實(shí)驗(yàn)主要學(xué)習(xí)以下幾方面的內(nèi)容 1. 了解熱電偶特性曲線；

　　2．觀察采集到的熱信號(hào)的實(shí)時(shí)變化情況。 3. 熟悉熱電偶類傳感器調(diào)理電路。

　　三、 實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備和材料：

　　所需儀器

　　四、

　　myDAQ、myboard、nextsense01熱電偶實(shí)驗(yàn)?zāi)�塊、萬(wàn)用表

　　注意事項(xiàng)

　　五、 在插拔實(shí)驗(yàn)?zāi)�塊時(shí)，盡量做到垂直插拔，避免因?yàn)椴灏尾划?dāng)而引起的接插件插針彎

　　曲，影響模塊使用。 六、 禁止彎折實(shí)驗(yàn)?zāi)�塊表面插針，防止焊錫脫落而影響使用。 七、 更換模塊或插槽前應(yīng)關(guān)閉平臺(tái)電源。 八、 開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，認(rèn)真檢查熱電偶的連接，避免連接錯(cuò)誤而導(dǎo)致的輸出電壓超量程，否

　　則會(huì)損壞數(shù)據(jù)采集卡。 九、 本實(shí)驗(yàn)儀采用的電偶為K型熱電偶和J型熱電偶。

　　十、 實(shí)驗(yàn)原理：

　　熱電偶是一種半導(dǎo)體感溫元件，它是利用半導(dǎo)體的電阻值隨溫度變化而顯著變化的特性實(shí)現(xiàn)測(cè)溫。

　　熱電偶傳感器的工作原理

　　熱電偶是一種使用最多的溫度傳感器，它的原理是基于1821年發(fā)現(xiàn)的塞貝克效應(yīng)，即兩種不同的導(dǎo)體或半導(dǎo)體A或B組成一個(gè)回路，其兩端相互連接，只要兩節(jié)點(diǎn)處的溫度不同，一端溫度為T，另一端溫度為T0，則回路中就有電流產(chǎn)生，見(jiàn)圖50-1（a），即回路中存在電動(dòng)勢(shì)，該電動(dòng)勢(shì)被稱為熱電勢(shì)。

　　圖50-1（a） 圖50-1（b）兩種不同導(dǎo)體或半導(dǎo)體的組合被稱為熱電偶。

　　當(dāng)回路斷開(kāi)時(shí)，在斷開(kāi)處a，b之間便有一電動(dòng)勢(shì)ET，其極性和量值與回路中的熱電勢(shì)一致，見(jiàn)圖50-1（b），并規(guī)定在冷端，當(dāng)電流由A流向B時(shí)，稱A為正極，B為負(fù)極。實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)ET較小時(shí)，熱電勢(shì)ET與溫度差（T-T0）成正比

　　十一、 實(shí)驗(yàn)步驟：

　　十二、 關(guān)閉平臺(tái)電源（myboard），插上熱電偶實(shí)驗(yàn)?zāi)�塊。開(kāi)啟平臺(tái)電源，此時(shí)可以看到

　　模塊左上角電源指示燈亮。

　　十三、 打開(kāi)nextpad,運(yùn)行熱電偶實(shí)驗(yàn)應(yīng)用程序

　　十四、 查看傳感器介紹，了解熱電偶的原理及溫差與熱電勢(shì)之間的關(guān)系。

　　十五、 在特性曲線頁(yè)面。選擇不同型號(hào)的熱電偶觀察各型號(hào)熱電偶的V-T，在測(cè)溫曲線的

　　下方，手動(dòng)模擬產(chǎn)生熱電勢(shì)的值，觀察測(cè)溫曲線。

　　十六、 在實(shí)驗(yàn)內(nèi)容頁(yè)面中了解實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容、操作方式和過(guò)程

　　十七、 在仿真頁(yè)面任意改變運(yùn)算放大器的輸出電壓值和運(yùn)算放大倍數(shù)，記錄E（T,T0）和

　　冷端溫度仿真的輸出值E（T0），將數(shù)據(jù)填寫到熱電偶溫度手動(dòng)測(cè)量表中，查表計(jì)算熱電偶的電勢(shì)所對(duì)應(yīng)的溫度值。 十八、 在測(cè)量頁(yè)面

　　十九、 選擇實(shí)際接入的電阻

　　二十、 在nextsense01中，用杜邦線將R2 R4鏈接到運(yùn)算放大器上。

　　二十一、 調(diào)零。將A、B端用杜邦線短接，調(diào)節(jié)模塊右側(cè)下方的電位器，對(duì)放大器的輸

　　出Vout進(jìn)行調(diào)零。 二十二、 測(cè)量。選擇K型或者J型熱電偶其中一個(gè)，連接到A、B兩端，在自動(dòng)測(cè)量頁(yè)

　　面，點(diǎn)擊頁(yè)面上的開(kāi)始按鈕進(jìn)行數(shù)據(jù)的采集和記錄，將熱電偶放置到熱水中記錄溫度的變化（溫度變化范圍至少30度）。 二十三、 在nextpad頁(yè)面中，點(diǎn)擊頁(yè)面右上的數(shù)據(jù)保存按鈕，選擇保存的表格，進(jìn)行數(shù)

　　據(jù)的保存。

　　二十四、 數(shù)據(jù)及結(jié)論（繪制數(shù)據(jù)點(diǎn)散圖，建立回歸方程，分析靈敏度和線性誤差）

　　冷場(chǎng)溫度 熱電偶輸出電勢(shì)（uV） 20.64 3543.21 20.65 3500.6 20.65 3731.66 20.65 3730.34 20.64 3797.56

　　測(cè)量點(diǎn)溫度

　　87.59 86.81 91.08 91.06 92.3

　　溫度差 66.95 66.16 70.43 70.41 71.66

　　20.64 20.65 20.65 20.65 20.64 20.65 20.65 20.66 20.66 20.65 20.66 20.65 20.66 20.64 20.66 3815.1 3561.15 3491.3 3509.37 3463.48 3472.74 3514.91 3535.65 3585.15 3601.62 3544.6 3443.76 3421.89 3410.39 3461.66 92.62 87.93 86.63 86.97 86.11 86.29 87.07 87.46 88.38 88.68 87.63 85.76 85.36 85.13 86.1

　　71.98 67.28 65.98 66.32 65.47 65.64 66.42 66.8 67.72 68.03 66.97 65.11 64.7 64.49 65.44

　　結(jié)論：

　　實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)ET較小時(shí)，熱電勢(shì)ET與溫度差（T-T0）成正比，被測(cè)傳感器的比例系數(shù)為54.020。根據(jù)半導(dǎo)體的電阻值隨溫度變化而顯著且有規(guī)律變化的這一特性，可以實(shí)現(xiàn)測(cè)溫功能。

　　篇二：大學(xué)生物實(shí)驗(yàn)論文要領(lǐng)

　　白色背景

　　題目：用短語(yǔ)，不用句子：……的研究，不要用學(xué)科題目作標(biāo)題；英文：A study of…… 通訊作者：BOSS，支持者

　　摘要：目的、方法、結(jié)果、結(jié)論。不宜舉例，不用引文。英文摘要調(diào)整一下，符合英文順序。關(guān)鍵詞：分子式、化學(xué)式不作為關(guān)鍵詞，要寫全名。常規(guī)技術(shù)不做關(guān)鍵詞如離心，英文關(guān)鍵詞用,隔開(kāi)

　　前言：常見(jiàn)的引言包括以下內(nèi)容：

　　1 提出課題的現(xiàn)實(shí)情況和背景；

　　2說(shuō)明課題的性質(zhì)、范疇及其重要性，突出研究的目的或者需要解決的問(wèn)題；

　　3 前人研究成果及其評(píng)價(jià)；

　　4 達(dá)到研究目的的研究方法和實(shí)（試）驗(yàn)設(shè)備；

　　5 研究工作的新發(fā)現(xiàn)。

　　研究背景理論依據(jù)（XX是什么，研究進(jìn)展，實(shí)驗(yàn)原理包括方法原理、實(shí)驗(yàn)對(duì)象原理即為什么選這兩個(gè)對(duì)象，有無(wú)關(guān)聯(lián)，判斷原理的依據(jù)）、研究目的（要解決什么問(wèn)題）、研究方法（怎樣研究）400-500字左右，文獻(xiàn)綜述包括在前言里。

　　寫前人……本研究……希望得到……的結(jié)果

　　材料：寫主要的，例如樹(shù)脂，Tris，其他就寫國(guó)產(chǎn)分析純，如NaCl，燒杯、試管不寫

　　方法：眾所周知的方法不寫，如離心。寫出方法名字，注明參考文獻(xiàn)，重點(diǎn)寫改進(jìn)方法。例如：提取效果為……的電泳進(jìn)行檢測(cè)

　　結(jié)果：比例尺、圖標(biāo)、放大倍數(shù)；不進(jìn)行評(píng)論評(píng)價(jià)分析討論，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不要原始濃度，電泳的各個(gè)泳道是什么一定要寫出來(lái)。洗脫圖自己重新做一個(gè)，標(biāo)注單位。柱層析的峰要寫標(biāo)號(hào)，注明是什么蛋白。

　　結(jié)論：實(shí)驗(yàn)表面結(jié)果，反映了什么現(xiàn)象。相同因素之間，不同因素之間。方法怎么樣。 討論：得到這樣結(jié)果的可能原因，原因大小程度。建議、改進(jìn)可放分析討論。1討論為什么會(huì)出現(xiàn)這樣的結(jié)果出現(xiàn)意味了什么？用理論解釋。2比較與前人異同（異：解釋差異；同：更加證明）3研究有什么新發(fā)現(xiàn)，可能的原因4實(shí)驗(yàn)的不足

　　其他：同一結(jié)果圖表不共存，如果圖不能直接說(shuō)明可以附上表，圖上無(wú)多余的線，違反總體趨勢(shì)的個(gè)別點(diǎn)可以去掉。折線圖橫軸按實(shí)驗(yàn)進(jìn)行順序編寫。小數(shù)點(diǎn)位數(shù)保持一致。 （適用于細(xì)胞生物學(xué)及植物生理學(xué)）

　　微生物及生物化學(xué)有待補(bǔ)充。。。

　　致謝：協(xié)助、資金支持，200字

　　生化海報(bào)：IgG與別人標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，pro標(biāo)準(zhǔn)曲線不過(guò)0點(diǎn)，標(biāo)準(zhǔn)pro只有280nm，幾個(gè)樣都要算。

　　圖名稱包括：方法、目的、對(duì)象

　　電泳：上樣順序、其他分子量、marker分子量、分析趨勢(shì)（遷移率一般達(dá)不到0.999） 紫外：峰1，峰2，那個(gè)是我們的

　　寫分析不寫說(shuō)明，與其他步驟聯(lián)系起來(lái)，層析與電泳聯(lián)系起來(lái)說(shuō)明

　　分析：最后有結(jié)論，濃度、回收率提取出來(lái)，圖有序列關(guān)系，按實(shí)驗(yàn)進(jìn)行順序

　　海報(bào)一般是豎的，存PDF或圖片

　　分析討論對(duì)結(jié)果討論，對(duì)別人展示好的一面，不是注意事項(xiàng)

　　要有說(shuō)明，表名稱，要有整體聯(lián)系性。

　　篇三：大連理工大學(xué) 生化實(shí)驗(yàn)報(bào)告——模版(新)

　　小牛腸堿性磷酸酶的提取及酶活測(cè)定、

　　考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量、

　　SDS-PAGE電泳法測(cè)定蛋

　　摘要 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)從小牛腸中提取小牛腸堿性磷酸酶，利用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，并測(cè)定酶的活性。最后通過(guò)SDS-聚丙烯凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子量.

　　關(guān)鍵詞 小牛腸堿性磷酸酶提取 酶活測(cè)定 考馬斯亮藍(lán)法 SDS-PAGE電泳法

　　本實(shí)驗(yàn)分為三部分。先通過(guò)對(duì)牛小腸內(nèi)膜的刮取，離心，沉淀析出等方法，提取牛小腸堿性磷酸酶；然后用考馬斯亮藍(lán)G-250與堿性磷酸酶結(jié)合，利用紫外分光光度計(jì)在一定波長(zhǎng)下測(cè)定結(jié)合物的吸收波長(zhǎng)，根據(jù)其吸光度與蛋白質(zhì)結(jié)合物的含量成正比的關(guān)系測(cè)定蛋白質(zhì)含量，進(jìn)而測(cè)定出蛋白質(zhì)的比活力；最后，通過(guò)SDS-聚丙烯凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子量，分析所獲得的電泳結(jié)果來(lái)推算出被測(cè)蛋白質(zhì)分子量的近似值。

　　1 實(shí)驗(yàn)部分

　　1.1 試劑與儀器

　　1.1.1小牛腸堿性磷酸酶的提純及酶活測(cè)定

　　1、 試劑

　　（1）正丁醇、丙酮（置-20℃冰箱保存）

　　（2）1mol/L醋酸（HAC）、1mol/LNaOH、硫酸銨

　　（3）平衡緩沖液：0.01mol/LTris-HCL,PH 8.0,(含1.0×10-3mol/LMgCl2和1.0×10-5mol/LZnCl2)。

　　（4）底物緩沖液：1mol/L二乙醇胺-鹽酸緩沖液（PH9.8，含0.5×10-3mol/LMgCl2）。

　　（5）酶的底物溶液：用底物緩沖液配制15×10-3mol/L對(duì)硝基苯磷酸二鈉溶液。（已加入底物緩沖液中）

　　2、儀器

　　勻漿機(jī)、冷凍離心機(jī)、恒溫水浴、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、離心管、剪刀、載玻片、不銹鋼盤、搪瓷盤、濾布、漏斗、分液漏斗、量筒、燒杯、移液槍、比色皿

　　1.1.2考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量

　　1、試劑

　　考馬斯亮藍(lán)、實(shí)驗(yàn)小牛腸堿性磷酸酶的提純及酶活測(cè)定所得酶液、生理鹽水

　　2、儀器

　　分光光度計(jì)、分析天平、玻璃比色杯、試管及試管架、移液槍

　　1.1.3 SDS-PAGE電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量

　　1、試劑

　　1）30%丙烯酰胺（acrylamide,Acr）置棕色瓶。

　　2）分離膠緩沖液：1.5mol/LTris-HCL緩沖液，pH8.8，已加入10%SDS。

　　3）濃縮膠緩沖液：0.5mol/LTris-HCL緩沖液，pH6.8，已加入10%SDS。

　　4）10%過(guò)硫酸銨（AP）（小離心管裝，提供驅(qū)動(dòng)丙烯酰胺和雙丙烯酰胺的聚合所必須的自由基，須新鮮配置。）

　　5）TEMED（四甲基乙二胺）（小離心管裝T，通過(guò)催化過(guò)硫酸銨形成自由基而加速丙烯酰胺和雙丙烯酰胺的聚合）

　　6）上揚(yáng)緩沖液（小離心管裝S）：稱100mgSDS、2mg溴酚藍(lán)、2g甘油，加0.1mL巰基乙醇、2mL-。-5mol/LpH8.0Tris-HCL,加超純水定容至10mL。

　　7）染色液：配置含0.1%考馬斯亮藍(lán)R250,40%（體積分?jǐn)?shù)）甲醇和10%（體積分?jǐn)?shù)）冰醋酸的染色液500mL，過(guò)濾后備用。

　　8）脫色液：500mL10%（體積分?jǐn)?shù)）甲醇和10%（體積分?jǐn)?shù)）冰醋酸的脫色液1000mL。

　　9）電泳緩沖液（含0.1%SDS，0.05mol/LTris，0.384mol/L甘氨酸pH8.3）.

　　2、儀器

　　電泳儀、電泳槽、制膠板、搖床、移液槍

　　1.2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

　　1.2.1小牛腸堿性磷酸酶的提純及酶活測(cè)定

　　1、酶的`分離提純

　　1）取新鮮小牛腸，用剪刀縱向剖開(kāi)，用載玻片刮去小腸內(nèi)粘膜，放到盤子一角。

　　2）統(tǒng)一將小腸黏膜液集中倒入勻漿機(jī)中，加1.5倍體積冰冷蒸餾水，高速勻漿15s，重復(fù)20次。

　　3）緩慢加入（總體積）1倍體積的冰冷正丁醇，高速勻漿15s，重復(fù)20次。

　　每組領(lǐng)取60mL的勻漿液，放入離心管中（離心管裝液量不能超過(guò)70%），用另一離心管用水配平（切記離心前連同離心管蓋子一起用天平配平），在4℃條件下，10000rpm，離心15min（離心管對(duì)稱放置）。

　　4）用濾布過(guò)濾去除雜質(zhì)（濾餅），倒入分液漏斗中，靜止分層（勿搖），去下層水相，用1mol/LHAc調(diào)pH到

　　4.9。4℃，10000rpm，離心10min。

　　5）得到上清26.5mL，放入離心管中，用1mol/LNaOH調(diào)pH至6.5，稱取質(zhì)量為溶液體積5%的硫酸銨1.33g(5g硫酸銨/100mL溶液)，加到離心管中溶解；再加0.47倍體積（12.45mL）冰冷丙酮，混勻，4℃（冰箱中）靜置30min以上。4℃，10000rpm，離心10min。

　　6）上清液36.5mL中加入1.07倍體積（39.06mL）冰冷丙酮，4℃靜置30min以上。4℃，10000rpm，離心10min。

　　7）取沉淀溶于2mL平衡緩沖液至全部溶解。置冰箱保存待用。

　　2、底物處理

　　底物（對(duì)硝基苯磷酸二鈉已溶于平衡緩沖液中）37℃水浴5min（注意：根據(jù)分光光度計(jì)使用情況，要檢測(cè)前加熱）

　　3、酶活檢測(cè)

　　1）將酶稀釋10倍（配制取10μL，溶于90μL平衡緩沖液中得到）

　　2）紫外分光光度計(jì)檢測(cè)條件：405nm波長(zhǎng)，測(cè)定時(shí)間60s，取值2s，記錄范圍0.0-1.5。

　　3）取2個(gè)2mL比色皿（0.5cm光程），加入1.5mL上述（2）加熱的底物緩沖液，校對(duì)歸零。

　　4）將稀釋10倍的酶液10μL加到其中1個(gè)比色皿中（儀器外側(cè)），用手堵住皿口。快速上下倒2次，放回分光光度計(jì)中，測(cè)定沒(méi)動(dòng)力學(xué)曲線。

　　1.2.2考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量

　　1、玻璃試管中加入5mL考馬斯亮藍(lán)。

　　2、在1.5mL離心管中，取上一實(shí)驗(yàn)得到的酶液分別稀釋50、100、200倍。

　　3、各取100μL加入到5mL考馬斯亮藍(lán)試管中，混勻，反應(yīng)5min以上，另各取100μL生理鹽水分別加入到5mL考馬斯亮藍(lán)試管中。（觀察藍(lán)色，以淺藍(lán)色為好）

　　4、紫外分光光度計(jì)檢測(cè)條件：595nm波長(zhǎng)

　　5、取2個(gè)比色皿（1cm光程）加入考馬斯亮藍(lán)（比色皿的2/3），分光光度計(jì)中校對(duì)歸零。

　　6、將樣品放入外側(cè)比色皿中，讀吸光值（得到醫(yī)治蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的度數(shù)即可，0.1-0.5之間）。

　　7、根據(jù)蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算酶蛋白濃度（乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)即得原始酶液蛋白濃度，注意單位）

　　1.2.3 SDS-PAGE電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量

　　1、裝板：將垂直板型電泳的玻璃片洗凈、晾干；放好膠條（棱朝上，平鋪），用夾子夾好玻璃板，上面插上梳子（注意下面2個(gè)夾子要水平，兩側(cè)夾子離梳子底部1-0.5cm，表明分離膠加的位置），垂直放置在水平臺(tái)面上

　　備用。

　　2、制備分離膠：在小燒杯中按下表配置所需濃度的分離膠。

　　分離膠制備（濃度10%，制備量10mL）

　　試劑

　　H2O 30%丙烯酰胺

　　1.5mol/LTris-HCL緩沖液pH8.8

　　10%過(guò)硫酸銨

　　TEMED 用量 4.1mL 3.4mL 2.4mL 100μL 10μL

　　注意：最后加入TEMED，應(yīng)快速搖勻分離膠，向玻璃板間隙，沿著長(zhǎng)玻璃板的內(nèi)側(cè)緩慢注膠，然后再用移液槍慢慢移動(dòng)注入乙醇200μL，以防止氧氣進(jìn)入膠內(nèi)。15min后，分離膠和乙醇之間出現(xiàn)分界線，表明分離膠凝固，倒出乙醇。

　　3、制備凝縮膠：在小燒杯中按下表配置所需濃度的濃縮膠。

　　濃縮膠制備（濃度5%，制備量6mL）

　　試劑

　　H2O 30%丙烯酰胺

　　0.5mol/LTris-HCL緩沖液pH6.8

　　10%過(guò)硫酸銨

　　TEMED

　　進(jìn)入氣泡，放置約20min，待濃縮膠凝固。

　　4、蛋白質(zhì)樣品處理（小離心管裝B）：在1.5mL離心管中按1:1體積比例，加樣品和上樣緩沖液（200μL:200μL）。100℃加熱3min使蛋白變性。

　　5、濃縮膠完全聚合后，去掉夾子和膠條，拔去梳子（注意不要產(chǎn)生氣魄，即電泳泳道），將凝膠玻璃板固定于電泳裝置內(nèi)槽上，加入電泳緩沖液（內(nèi)、外槽，查漏），緩沖液高過(guò)玻璃板凹面。

　　6、用移液槍依次在泳道加樣(5個(gè)20μL，4個(gè)40μL)。（本組將marker置于第六泳道）

　　7、電泳：連接正、負(fù)極，打開(kāi)電源（穩(wěn)壓130V或電流50-60mA），開(kāi)始時(shí)，電流控制在40A，樣品進(jìn)入分離膠后，緩慢升高電壓至140V或電流50-60mA保持電壓或電流強(qiáng)度不變。帶溴酚蘭指示劑遷移至下沿處，停止電泳，需1.5h左右。

　　8、剝膠染色：電泳結(jié)束后，取出凝膠玻璃板，用水沖洗，用金屬片從玻璃兩側(cè)輕輕撬開(kāi)。使板內(nèi)進(jìn)入空氣，同時(shí)用水沖洗，取出凝膠板，將剝離下來(lái)的凝膠用水漂洗，轉(zhuǎn)入染色缸中。加染色液，至搖床染色15min。

　　9、脫色：染色完畢，回收染色液，用水漂洗，加入脫色液，置搖床脫色，30min換1次脫色液，脫色至背景清晰。

　　10、觀察測(cè)定蛋白的遷移率及條帶，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)樣品，分析蛋白樣品的分子量及純度。

　　11、拍照電泳結(jié)果，用于完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

　　用量 3.4mL 1.0mL 1.5mL 60μL 8μL 注意：一旦加入TEMED，應(yīng)快速搖勻濃縮膠，在已凝固的分離膠層上加濃縮膠，立即將梳子插入膠液頂部，避免

　　2 結(jié)果與討論

　　2.1 小牛腸堿性磷酸酶的酶活測(cè)定

　　堿性磷酸酶酶活定義：在37℃條件下，以每分鐘催化水解1μmol底物的酶量為一個(gè)酶活力單位。

　　堿性磷酸酶作用于緩沖液中的對(duì)硝基苯磷酸二鈉，使之水稀釋放出對(duì)硝基苯酚，后者在405nm光波長(zhǎng)下有最大吸收，通過(guò)測(cè)定吸光值的變化率，可測(cè)知酚的生成量，從而計(jì)算出酶的活性單位。

　　酶活力的計(jì)算：

　　比活力（U/mg）= ΔA/min×VR×DE405×VE×C×L

　　1、由實(shí)驗(yàn)小牛腸堿性磷酸酶的提純及酶活測(cè)定中實(shí)驗(yàn)步驟可知，

　　反應(yīng)液的體積VR= 1.5mL

　　稀釋倍數(shù) D= 10

　　405nm波長(zhǎng)下對(duì)硝基苯酚的摩爾消光系數(shù)E405= 18.3L/(mol×cm)

　　所加酶液體積VE= 0.01mL

　　比色皿光程 L= 0.5cm

　　2、405nm波長(zhǎng)下的吸光值的變化率通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)量得到酶動(dòng)力學(xué)曲線（圖1）可以得到，ΔA/min=0.6179 (根據(jù)圖片，自己估算斜率，注意單位。)

　　/看后刪除

　　說(shuō)明： 圖片均要用自己的。

　　半欄圖片寬為8.15厘米，高為4.4~5.5厘米之間，對(duì)于特別大的圖可加大寬度。通欄圖片寬度為16.3厘米，高為4.4~5.5厘米之間，圖說(shuō)為字號(hào)為小5號(hào)黑體字。

　　/

　　表注用小5號(hào)字，表字用6號(hào)字。

　　圖1.酶動(dòng)力學(xué)曲線

　　3、蛋白質(zhì)原始濃度C可由實(shí)驗(yàn)考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量獲得

　　考馬斯亮藍(lán)G-250測(cè)定蛋白質(zhì)含量屬于燃料結(jié)合法的一種。在一定蛋白濃度范圍內(nèi)（0.01-1.0mg/mL）,蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在

　　595nm

　　波長(zhǎng)下的光吸收與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用于蛋白質(zhì)的定量測(cè)量。

　　通過(guò)實(shí)驗(yàn)，利用紫外分光光堆積測(cè)定稀釋50倍的酶液讀得吸光值為0.1478A，利用考馬斯亮藍(lán)常量法測(cè)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2）及其標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合解析式y(tǒng)=0.697x-0.007得稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度為0.2221mg/mL。

　　故蛋白質(zhì)原始濃度C=50×0.2221mg/mL=11.105mg/mL

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